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白介素27ELISA試劑盒的詳細操作步驟是怎樣的!

日期:2020-10-27瀏覽:947次

   白介素27ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素,再與HRP標記的白介素抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。
  白介素27ELISA試劑盒的操作步驟:
  1、標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/L,15 ng/L)。
  2、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3、溫育:用封板膜封板后置38℃溫育30分鐘。
  4、配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  5、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  6、加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
  7、溫育:操作同3。
  8、洗滌:操作同5。
  9、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  10、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  11、測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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